Sr. Editor:
El diagnóstico del rechazo del injerto es uno de los aspectos fundamentales de la atención de los pacientes con trasplante cardiaco (TC). La biopsia endomiocárdica (BEM) tiene importantes limitaciones, ya que se trata de una prueba invasiva, con variabilidad en la interpretación y sensibilidad limitada1-3. Por tanto, es de gran interés disponer de un método diagnóstico no invasivo que facilite el seguimiento de los pacientes con TC.
Los patrones de expresión génica de los linfocitos de sangre periférica pueden constituir una herramienta de alta sensibilidad y especificidad que permita identificar a los pacientes que presentan rechazo y, así, evitar las molestias de la BEM. Presentamos los resultados preliminares de un estudio cuyo objetivo ha sido la búsqueda de un grupo de genes candidatos que puedan usarse en un test de expresión molecular en sangre periférica capaz de detectar de forma no invasiva el rechazo cardiaco.
Los experimentos de análisis de la expresión génica se realizaron a partir de 6 muestras de sangre periférica procedentes de pacientes con TC, extraídas el mismo día de la BEM. El diagnóstico de rechazo se realizó según la clasificación de la International Society of Heart and Lung Transplantation (ISHLT)4. Tres de las muestras correspondían a pacientes con rechazo (grado ≥ 2R ISHLT) y 3 a pacientes sin rechazo (grado 0R ISHLT). Las muestras de sangre se recogieron en tubos que contenían una solución para la estabilización del ARN (PAXgene Blood RNA Tubes, Qiagen) y se guardaron a 80 ºC hasta su análisis.
El análisis genético se realizó con microarrays Affymetrix (GeneChip Human Genome U133 Plus 2.0 Array). Mediante el algoritmo de comparación de Genespring se han encontrado diferencias en la expresión de 262 genes. El cluster jerárquico bidimensional permite comprobar la existencia de patrones de expresión diferenciales y consistentes en las muestras con rechazo comparadas con las muestras control. De estos 262 genes, en la tabla 1 se muestran los que podrían ser utilizados como genes candidatos.
Se comprobó que había cinco rutas metabólicas en las que al menos estaban implicados dos genes con nivel de expresión modificada. Estas rutas metabólicas son: apoptosis (4 genes), ruta de las MAP-cinasas (5 genes), ruta de señalización de las células B (2 genes), linaje de células hematopoyéticas (2 genes), ruta de señalización de receptores de células T (2 genes).
Los resultados obtenidos son consistentes con la hipótesis de la estimulación del sistema inmunológico implicada en el rechazo de los órganos trasplantados. Es interesante destacar que Horwitz et al5 utilizaron una metodología similar y encontraron que CFLAR, un gen implicado en la vía apoptótica, estaba alterado en pacientes con rechazo del órgano trasplantado. Algo similar ocurre con los resultados obtenidos por Deng et al6, quienes han encontrado alteraciones en la expresión de genes, relacionados con la ruta de las MAP-cinasas, apoptosis y receptores de células T.
En conclusión, en este estudio exploratorio en pacientes con TC hemos observado diferencias en la expresión génica entre los que presentaban rechazo y los que no lo presentaban. De las 5 vías identificadas en las que hay genes con expresión alterada, la ruta apoptótica y la de las MAP-cinasas parecen tener un mayor número de genes implicados. El escaso número de muestras estudiadas limita la interpretación de los resultados. Sin embargo, consideramos que los resultados de este trabajo preliminar justifican las expectativas depositadas en esta prometedora estrategia, que puede contribuir a desarrollar un test molecular para el control del tratamiento inmunodepresor en pacientes con trasplante.
Este estudio ha sido financiado con una Beca de la Sección de Insuficiencia Cardiaca de la Sociedad Española de Cardiología, 2003 (título del trabajo: «Análisis de expresión génica en células mononucleares circulantes mediante Real-time RT-PCR en pacientes con trasplante cardiaco. Estudio de su posible relación con el rechazo cardiaco») y por la Red Nacional de Investigación Cardiovascular, RECAVA C03/01.